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Anchorage to the cytosolic face of the ER membrane: a new strategy to stabilize a cytosolic recombinant antigen in plants. (Articolo in rivista)
- Type
- Label
- Anchorage to the cytosolic face of the ER membrane: a new strategy to stabilize a cytosolic recombinant antigen in plants. (Articolo in rivista) (literal)
- Anno
- 2008-01-01T00:00:00+01:00 (literal)
- Http://www.cnr.it/ontology/cnr/pubblicazioni.owl#doi
- 10.1111/j.1467-7652.2008.00342.x (literal)
- Alternative label
Barbante A., Irons S., Hawes C., Frigerio L., Vitale A., and Pedrazzini E (2008)
Anchorage to the cytosolic face of the ER membrane: a new strategy to stabilize a cytosolic recombinant antigen in plants.
in Plant biotechnology journal (Print)
(literal)
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- Barbante A., Irons S., Hawes C., Frigerio L., Vitale A., and Pedrazzini E (literal)
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- La strategia consiste nell'ancorare l'antigene al lato citosolico della membrana del reticolo endoplasmatico utilizzando il dominio transmembrana del citocromo b5, una proteina con una emivita molto lunga. In tal modo si ha una stabilizzazione dell'antigene ancorato alla membrana rispetto all'antigene libero nel citosol. Ne risulta quindi un maggiore accumulo nella pianta transgenica. Questa nuova strategia può essere utilizzata quando si vogliono aumentare i livelli di produzione di una proteina eterologa in piante transgeniche. (literal)
- Http://www.cnr.it/ontology/cnr/pubblicazioni.owl#url
- http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1467-7652.2008.00342.x/full (literal)
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- Rivista
- Http://www.cnr.it/ontology/cnr/pubblicazioni.owl#note
- doi: 10.1111/j.1467-7652.2008.00342.x
La rivista su cui l'articolo è stato pubblicato è una delle principali riviste scientifiche che pubblicano lavori di biotecnologia vegetale e ha fattore d'impatto 3.378 (literal)
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- Pubblicazione scientifica riguardante una nuova strategia per aumentare il livello di accumulo della proteina HIV-Nef, un potenziale vaccino, in piante di tabacco transgenico (literal)
- Note
- ISI Web of Science (WOS) (literal)
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- AB, AV, EP - IBBA-CNR, Milano, I; SI, CH - Oxford Brookes University, UK; FL - University of Warwick, UK (literal)
- Titolo
- Anchorage to the cytosolic face of the ER membrane: a new strategy to stabilize a cytosolic recombinant antigen in plants. (literal)
- Abstract
- The levels of accumulation of recombinant vaccines in transgenic plants are protein specific and strongly influenced by the subcellular compartment of destination. The human immunodeficiency virus protein Nef (negative factor), a promising target for the development of an antiviral vaccine, is a cytosolic protein that accumulates to low levels in transgenic tobacco and is even more unstable when introduced into the secretory pathway, probably because of folding defects in the non -cytosolic environment. To improve Nef accumulation, a new strategy was developed to anchor the molecule to the cytosolic face of the endoplasmic reticulum (ER) membrane. For this purpose, the Nef sequence was fused to the C-terminal domain of mammalian ER cytochrome b5, a long-lived, tail-anchored (TA) protein. This consistently increased Nef accumulation by more than threefold in many independent transgenic tobacco plants. Real-time polymerase chain reaction of mRNA levels and protein pulse-chase analysis indicated that the increase was not caused by higher transcript levels but by enhanced protein stability. Subcellular fractionation and immunocytochemistry indicated that Nef-TA accumulated on the ER membrane. Over-expression of mammalian or plant ER cytochrome b5 caused the formation of stacked membrane structures, as observed previously in similar experiments performed in mammalian cells; however, Nef-TA did not alter membrane organization in tobacco cells. Finally, Nef could be removed in vitro by its tail-anchor, taking advantage of an engineered thrombin cleavage site. These results open up the way to use tail anchors to improve foreign protein stability in the plant cytosol without perturbing cellular functions. (literal)
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