Descrizione del modulo "STUDIO DEI FATTORI DI TRASCRIZIONE REGOLATORI DEI GENI GLOBINICI (ME.P03.008.007)"

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  • Descrizione del modulo "STUDIO DEI FATTORI DI TRASCRIZIONE REGOLATORI DEI GENI GLOBINICI (ME.P03.008.007)" (literal)
Potenziale impiego per bisogni individuali e collettivi
  • L'individuazione dei fattori regolatori coinvolti nella modulazione dell'espressione dei geni globinici embrionali, fetali ed adulti potrebbe portare allo sviluppo di una terapia farmacologica della b-talassemia e dell'amemia Falciforme. (literal)
Tematiche di ricerca
  • Il modulo di ricerca si basa sull'identificazione di nuovi fattori di trascrizione in grado di transattivare l'espressione del gene gamma-globinico fetale. Tale linea di ricerca si fonda sull'osservazione che le b-talassemie potrebbero essere guarite se si comprendesse e potesse manipolare il fenomeno dello switching globinico. Lo switch emoglobinico è il processo attraverso il quale il sito della sintesi globinica durante la vita fetale si sposta dai geni g-globinici ai geni che codificano per le catene globiniche adulte b- e d. È ben noto che un incremento della produzione di emoglobina F (costituita da tetrameri alfa2/gamma2) migliora il decorso clinico sia della talassemia che dell'anemia falciforme. (literal)
Competenze
  • Analisi del DNA, RNA e proteine, clonaggio di DNA e cDNA, analisi di interazioni proteine-DNA in vitro (Emsa) e in vivo (Chromatin immunoprecipitation assay), mutagenesi in vitro, trasferimento genico in procarioti ed eucarioti, transfezioni stabili e transitorie in linee cellulari,Colture di cellule BFU-E da sangue, silenziamento genico (shRNA), produzione particelle lentivirali , Real time qPCR, Analisi di Chromosome conformation capture (3C), genome editing tramite il sistema CRISP/Cas9. (literal)
Tecnologie
  • In generale gli studi includeranno: preparazione di vettori lentivirali di espressione genica, preparazione delle particelle lentivirali e analisi del titolo virale, preparazione di specifici costrutti Crisp/Cas9 , colture cellulari primarie da sangue periferico, trasduzione o elettroporazione cellulare, Real- Time qPCR, Western Blot, ChIp assay. (literal)
Obiettivi
  • Questo progetto di ricerca ha come scopo lo studio dell'attività di fattori regolatori della trascrizione dei geni globinici. Specificatamente contiamo di studiare gli effetti della sovra-espressione e della repressione dei geni KLFs , Myb, bcl11 e HMG in cellule primarie ematopoietiche umane. (literal)
Stato dell'arte
  • La riattivazione della espressione del gene g-globinico rappresenta un bersaglio ideale per la terapia genica della talassemia. Poiché l'espressione dei geni globinici è prevalentemente controllata a livello della trascrizione, ci si attende che il progresso nella terapia genica di queste anemie ereditarie sia possibile solo dopo la individuazione dei fattori regolatori coinvolti nella modulazione dell'espressione dei geni globinici embrionari, fetali ed adulti. Negli ultimi 15 anni, anche con contributi del nostro Istituto, sono state individuate gran parte delle sequenze e dei geni regolatori implicati nella regolata espressione dei geni b-globinici quali: Bcl11, cMyb , HMG, GKLF e KLF6. Gli studi gia eseguiti ed in progresso in questa linea di ricerca riguardano lo sviluppo di cassette di espressione basate su vettori lentivirali di terza generazione, che permettano di sovraesprimere o di inibire l'espressione di dei fattori di trascrizione in esame. Contiamo così di poter valutare come la presenza o l'assenza di ogni singolo fattore di trascrizione in esame possa modulare l'espressione dei geni g-globinici. (literal)
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