Descrizione della commessa "Malattie genetiche dovute a difetti nella riparazione del DNA che predispongono ai tumori. Analisi genetica funzionale dei fattori importanti per l'integrità del genoma. (ME.P05.005)"

Type
Label
  • Descrizione della commessa "Malattie genetiche dovute a difetti nella riparazione del DNA che predispongono ai tumori. Analisi genetica funzionale dei fattori importanti per l'integrità del genoma. (ME.P05.005)" (literal)
Potenziale impiego per bisogni individuali e collettivi
  • Prevenzione e diagnosi di malattie ereditarie. Identificazione di nuovi geni-malattia. Individuazione di bersagli molecolari per la terapia dei tumori. Nuovi approcci per la produzione di proteine ricombinanti di interesse terapeutico. Individuazione di strategie per migliorare l'efficacia delle terapie antitumorali. Saggi per valutazione immunofluorescente di 8-oxoGuanina (8-oxoG). (literal)
Strumentazione
  • Il laboratorio è dotato di un'adeguata strumentazione per l'allestimento, il mantenimento e la propagazione di colture cellulari, per la purificazione, la manipolazione e l'analisi di acidi nucleici e per l'analisi elettroforetica di proteine. Sono disponibili: -microscopi a luce diretta, a fluorescenza e confocale e relativi software per il processamennto digitalizzato delle immagini, -un sistema di videomicroscopia in campo chiaro e in fluorescenza per l'analisi dinamica di marcatori molecolari in cellule vive, -un microiniettore manuale per cellule somatiche, -un sistema combinato chimico-fisico per ottenere alte efficienze di trasfezione in colture primarie, -un luminometro GloMax per l'analisi dell'espressione genica e dei promotori e -un termociclatore LightCycler per real time PCR quantitativa. Il laboratorio è dotato di scanner a laser per l'analisi qualitativa e quantitativa di immagini autoradiografiche e di fluorescenza (PhosphorImager e Typhoon) e di una camera CCD raffreddata per l'acquisizione di immagini chemiluminescenti (Chemidoc XRS). Per mantenere competitiva la ricerca, sarà necessario acquisire nuova strumentazione come dettagliato di seguito. (literal)
Tematiche di ricerca
  • Definizione della relazione genotipo-fenotipo in pazienti con difetti nel NER e studio dei relativi pathways alterati. Studio di geni differenzialmente espressi durante la trasformazione neoplastica e di meccanismi di instabilità genomica. Rilevanza dell'acetilazione di proteine della riparazione del DNA, e della regolazione del processo da parte di inibitori del ciclo cellulare, nei meccanismi di risposta cellulare a danno genotossico. (literal)
Competenze
  • Lo svolgimento della ricerca richiede competenze di biologia molecolare e cellulare, genetica molecolare, citogenetica e biochimica. Tali competenze sono disponibili nel gruppo e vengono continuamente integrate grazie all'attivo scambio di informazioni, materiale, nuove tecnologie con i gruppi di ricerca che operano in ambito nazionale ed internazionale con cui sono in corso collaborazioni formalizzate in alcuni casi da progetti finanziati da fonti esterne. (literal)
Potenziale impiego per processi produttivi
  • Ceppi e linee cellulari difettive in specifiche funzioni coinvolte nella stabilità del genoma. Vettori per l'espressione di geni-malattia. Protocolli diagnostici. Saggi per l'individuazione di portatori sani di geni-malattia. Modelli tumorali per lo studio di agenti chemioterapici. Saggi per l'analisi della deformabilità cellulare. (literal)
Tecnologie
  • Modelli di intervento delle proteine nella riparazione per excisione di nucleotidi e nella trascrizione. Complementazione delle funzioni difettive in malattie ereditarie caratterizzate da predisposizione allo sviluppo di tumori, anomalie dello sviluppo fisico e mentale ed invecchiamento precoce. Modelli cellulari per la trasformazione cellulare. Produzione di proteine del NER ricombinanti e con definite mutazioni. Metodi di analisi delle proprietà meccaniche delle cellule tumorali. Produzione di vettori di espressione in mammifero per proteine della riparazione del DNA con mutazioni nei siti di acetilazione. (literal)
Obiettivi
  • Definizione della relazione tra difetti nella riparazione del DNA e nella trascrizione. Definizione del ruolo di alcuni fattori coinvolti nel mantenimento della stabilità del genoma in tappe cruciali della carcinogenesi, dello sviluppo e del differenziamento. Definizione del ruolo di modificazioni post-traduzionali nella regolazione dei processi di riparazione del DNA. (literal)
Stato dell'arte
  • L'integrità del genoma è uno dei campi più affascinanti della ricerca medica e biologica. È ben nota la correlazione tra danno al DNA e predisposizione allo sviluppo di tumori, invecchiamento e processi degenerativi, così come la relazione causale tra diverse malattie ereditarie e specifiche alterazioni nei sistemi deputati al controllo e al mantenimento dell'integrità del genoma. Si vanno inoltre accumulando evidenze di complesse inter-relazioni tra questi processi e della loro connessione con i meccanismi coinvolti nell'espressione del genoma. Notevole interesse si è quindi sviluppato verso queste tematiche per le ricadute che tali studi hanno non solo per la patologia clinica ma anche per la salute generale. (literal)
Tecniche di indagine
  • Sono utilizzate tecniche consolidate d'analisi cellulare, genetica e molecolare in cellule umane e di roditore, e nuovi approcci biochimici, molecolari, di microiniezione di proteine e DNA e di in vivo imaging. Sono state messe a punto tecniche per la crescita in vitro di cellule staminali tumorali, saggi chinasici e metodi di ChIP sequencing, RNAseq, ChIP-Western e silenziamento genico. Sono stati ottimizzati protocolli di trasfezione di sistemi cellulari con bassa efficienza di trasfezione, di acquisizione digitalizzata di immagini in chemiluminescenza e fluorescenza tramite Chemi Doc XRS, d'analisi dell'espressione genica e dei promotori tramite GloMax, d'analisi dei livelli di trascritto e allele-specificità tramite termociclatore Real Time e di clonaggio di cDNA con tecnologia Gateway. Permane la necessità di integrare il microscopio a fluorescenza con altri obbiettivi, software e motorizzazioni sugli assi XY e sulla ruota porta filtri. (literal)
Descrizione di

Incoming links:


Descrizione
data.CNR.it