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A novel extracellular subtilisin-like protease from the hyperthermophile Aeropyrum pernix K1: biochemical properties, cloning and expression. (Articolo in rivista)
- Type
- Label
- A novel extracellular subtilisin-like protease from the hyperthermophile Aeropyrum pernix K1: biochemical properties, cloning and expression. (Articolo in rivista) (literal)
- Anno
- 2003-01-01T00:00:00+01:00 (literal)
- Http://www.cnr.it/ontology/cnr/pubblicazioni.owl#doi
- 10.1007/s00792-003-0337-4 (literal)
- Alternative label
Catara G., Ruggiero G., La Cara F., Digilio F.A., Capasso A., Rossi M. (2003)
A novel extracellular subtilisin-like protease from the hyperthermophile Aeropyrum pernix K1: biochemical properties, cloning and expression.
in Extremophiles (Tokyo, Print)
(literal)
- Http://www.cnr.it/ontology/cnr/pubblicazioni.owl#autori
- Catara G., Ruggiero G., La Cara F., Digilio F.A., Capasso A., Rossi M. (literal)
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- Impact Factor 2.291. (literal)
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- Rivista
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- Sono descritte lidentificazione, caratterizzazione, lisolamento, il clonaggio e l espressione in mesofili del gene di una nuova proteasi extracellulare da Aeropyrum pernix K1, un microrganismo ipertermofilo che cresce ottimamente tra 90 e 100°C. Lenzima, che è stato denominato Pernisina , ha una massa molecolare di 34 kDa e mostra una straordinaria termostabilità e termoattività. Infatti ha unattività ottimale ad una temperatura di circa 90°C che diminuisce solo del 20% a 120°C, ed è stabile per almeno 4 ore a 120°C. Ha un pH ottimale tra 6.5 e 10.0. Tra le proteine testate come substrato, oltre che sullazocaseina, la Pernisina ha unottima attività sullemoglobina, lovalbumina, la sieralbumina bovina e lazocollagene. Studi di inibizione indicano che la Pernisine è una serina metalloproteasi della famiglia delle subtilisine. È riportata la sequenza aminoacidica della Pernisina nonché la sequenza nucleotidica che codifica per lenzima.È stato messo a punto un metodo per produrre la Pernisina in opportune quantità con la tecnologia del DNA ricombinante e per purificarla per trattamento al calore. Inoltre la Pernisina è in grado di digerire varie proteine a temperature tra i 60 ed i 130 °C con recupero dellattività anche in presenza di detergenti. (literal)
- Note
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- Titolo
- A novel extracellular subtilisin-like protease from the hyperthermophile Aeropyrum pernix K1: biochemical properties, cloning and expression. (literal)
- Abstract
- A novel extracellular serine protease designated Pernisine was purified to homogeneity and characterized from the archaeon Aeropyrum pernix K1. The molecular mass, estimated by SDS-PAGE analysis and by gel filtration chromatography, was about 34 kDa suggesting that the enzyme is monomeric. Pernisine was active in a broad range of pH (5.0-12.0) and temperature (60-120 degrees C) with maximal activity at 90 degrees C and between pH 8.0 and 9.0. In the presence of 1 mM CaCl(2) the activity, as a function of the temperature, reached a maximum at 90 degrees C but at 120 degrees C the enzyme retained almost 80% of its maximal activity. Activity inhibition studies suggest that the enzyme is a serine metalloprotease and biochemical data indicate that Pernisine is a subtilisin-like enzyme. The protease gene, identified from the sequenced genome of A. pernix, was amplified from total genomic DNA by PCR technique to construct the expression plasmid pGEX-Pernisine. The Pernisine, lacking the leader sequence, was expressed in Escherichia coli BL21 strain as a fusion protein with glutathione- S-transferase. The biochemical properties of the recombinant enzyme were found to be similar to those of the native enzyme. (literal)
- Prodotto di
- Autore CNR
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