The Aes protein and the monomeric alpha-galactosidase from Escherichia coli form a non-covalent complex. Implications for the regulation of carbohydrate metabolism (Articolo in rivista)

Type
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  • The Aes protein and the monomeric alpha-galactosidase from Escherichia coli form a non-covalent complex. Implications for the regulation of carbohydrate metabolism (Articolo in rivista) (literal)
Anno
  • 2002-01-01T00:00:00+01:00 (literal)
Http://www.cnr.it/ontology/cnr/pubblicazioni.owl#doi
  • 10.1074/jbc.M207398200 (literal)
Alternative label
  • Mandrich L., Caputo E., Martin B.M., Rossi M., Manco G. (2002)
    The Aes protein and the monomeric alpha-galactosidase from Escherichia coli form a non-covalent complex. Implications for the regulation of carbohydrate metabolism
    in The Journal of biological chemistry (Print)
    (literal)
Http://www.cnr.it/ontology/cnr/pubblicazioni.owl#autori
  • Mandrich L., Caputo E., Martin B.M., Rossi M., Manco G. (literal)
Pagina inizio
  • 48241 (literal)
Pagina fine
  • 48247 (literal)
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  • Il lavoro si inquadra negli studi del rapporto struttura-funzione delle esterasi della famiglia HSL, di cui ci occupiamo da diversi anni. Lo studio comparativo di questa esterasi mesofila rispetto alle omologhe termofile ed ipertermofile ci ha consentito di inserirci in un altro filone di studi di notevole interesse a livello internazionale e cioè quello delle interazioni proteina-proteina e del ruolo che esse hanno nel controllo del metabolismo batterico. L’interesse è dimostrato dal fatto che in questa specifica occasione abbiamo collaborato con un esperto di spettrometria di massa del National Institute of Mental Health, USA utilizzando una tecnologia di recente introduzione quale quella del SELDI-TOF per lo studio del complesso. (literal)
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  • 277 (literal)
Rivista
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  • 7 (literal)
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  • Nell’ambito dello studio comparativo delle esterasi della famiglia HSL è stata overespressa e purificata l’esterasi Aes di E. coli. Tale enzima è coinvolto nella regolazione di MalT, l’attivatore trascrizionale del regulone del maltosio. L’attività di MalT è inibita dall’ interazione proteina–proteina con Aes. Durante l’ultimo passo della procedura di purificazione, Aes è stato eluito da una colonna MonoQ come una forma che migrava in maniera anomala a 56kDa su una colonna Superdex 75. Inoltre, era identificata una forma minore contenente un polipeptide di 50kDa. Con un’analisi combinata di gel filtrazione e SELDI-TOF è stato possibile dimostrare la presenza in questo picco di un complesso di 87-kDa contenente Aes e il polipeptide di 50 kDa in rapporto 1:1. L’attività esterasica associata con la forma di 87kDa è stata dimostrata essere più elevata di sei volte rispetto all’attività della forma da 56kDa. La sequenza N-terminale del polipeptide da 50kDa ha consentito di dimostrare la sua identità con l’alfa-galattosidasi di E. coli. Cellule di E. coli over esprimenti Aes erano alterate nella loro crescita in terreno minimo contenete raffinosio come unica fonte di carbonio. Poiché l’alfa-galattosidasi è coinvolta nel metabolismo del raffinosio questi risultati indicano un ruolo potenziale di Aes nella regolazione del metabolismo dei carboidrati in E. coli. (literal)
Note
  • ISI Web of Science (WOS) (literal)
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  • Mandrich L., Rossi M., Manco G. IBP-CNR Caputo E. Martin B.M. National Institute of Mental Health USA (literal)
Titolo
  • The Aes protein and the monomeric alpha-galactosidase from Escherichia coli form a non-covalent complex. Implications for the regulation of carbohydrate metabolism (literal)
Abstract
  • Aes, a 36-kDa acetylesterase from Escherichia coli, belongs to the hormone-sensitive lipase family, and it is involved in the regulation of MalT, the transcriptional activator of the maltose regulon. The activity of MalT is depressed through a direct protein-protein interaction with Aes. Although the effect is clear-cut, the meaning of this interaction and the conditions that trigger it still remain elusive. To perform a comparative thermodynamic study between the mesophilic Aes protein and two homologous thermostable enzymes, Aes was overexpressed in E. coli and purified. At the last step of the purification procedure the enzyme was eluted from a Mono Q HR 5/5 column as a major form migrating, anomalously, at 56 kDa on a calibrated Superdex 75 column. A minor peak that contains the Aes protein and a polypeptide of 50 kDa was also detected. By a combined analysis of size-exclusion chromatography and surface-enhanced laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry, it was possible to demonstrate the presence in this peak of a stable 87-kDa complex, containing the Aes protein itself and the 50-kDa polypeptide in a 1:1 ratio. The homodimeric molecular species of Aes and of the 50-kDa polypeptide were also detected. The esterase activity associated with the 87-kDa complex, when assayed with p-nitrophenyl butanoate as substrate, proved 6-fold higher than the activity of the major Aes form of 56 kDa. Amino-terminal sequencing highlighted that the 50-kDa partner of Aes in the complex was the alpha-galactosidase from E. coli. The E. coli cells harboring plasmid pT7-SCII-aes and, therefore, expressing Aes were hampered in their growth on a minimal medium containing raffinose as a sole carbon source. Because alpha-galactosidase is involved in the metabolism of raffinose, the above findings suggest a potential role of Aes in the regulation of carbohydrate metabolism in E. coli. (literal)
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