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Experimental layout, data analisys, and thresholds in ELISA testing of maize for aphid-borne viruses. (Articolo in rivista)

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Experimental layout, data analisys, and thresholds in ELISA testing of maize for aphid-borne viruses. (Articolo in rivista) (literal)

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Caciagli P. (1), Verderio A. (2). (2003)
Experimental layout, data analisys, and thresholds in ELISA testing of maize for aphid-borne viruses.
in Journal of virological methods; Elsevier Science Publishers, Amsterdam (Paesi Bassi)
(literal)

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Files di esempio per l'elaborazione dei dati, con la procedura già implementata e modificabili per le varie necessità, sono diponibili presso il primo autore. (literal)

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Rivista

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Vengono analizzati parecchi aspetti delle procedura ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) e dell'analisi dei dati ottenuti, con l'intento di trovare un metodo rapido ed affidabile per stabilire la soglia tra risposta positiva e risposta negativa, particolamente nel caso in cui si debba analizzare un gran numero di campioni. Si è così stabilito uno schema di utilizzo della piastra per ELISA che minimizza la variabilità incontrollata ed ottimizza il numero di controlli positivi e negativi. E' stata determinata la trasformazione dei valori di assorbanza (A) che stabilizza la varianza, consentendo in tal modo l'uso di metodi parametrici nell'analisi statistica dei dati. Valori trasformati di A sono quindi stati usati per calcolare i veri limiti per i falsi positivi (C) e per i falsi negativi(D) ad un determinato livello di protezione. Sono anche stati discussi i possibili metodi per ridurre il numero di campioni che risultano indecidibili, ovvero compresi tra C e D. L'intera procedura è stata poi implementata in un foglio elettronico di largo impiego. Con l'aggiunta di poche istruzioni del tipo 'SE...ALLORA...OPPURE', i risultati dell'analisi ELISA possono essere ottenuti nella forma tricotomica 'negativo/indecidibile/positivo' in modo praticamente automatico. Questo ha consentito di saggiare rapidamente oltre 1100 campioni di mais per ben 7 virus trasmessi da afidi ovvero quasi 8000 campioni ELISA. (literal)

Note

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(1) Istituto di Virologia VEgetale - CNR, Torino. (2) Istituto Sperimentale per la Cerealicoltura - MiPA, Sezione di Bergamo. (literal)

Titolo

Experimental layout, data analisys, and thresholds in ELISA testing of maize for aphid-borne viruses. (literal)

Abstract

Several aspects of ELISA procedures and data analysis have been examined in an attempt to find a rapid and reliable method for discriminating between positive and negative results when testing a large number of samples. A layout of ELISA plates was designed to reduce uncontrolled variation and to optimise the number of negative and positive controls. A transformation using the fourth root (A^1/4) of the optical density readings corrected for the blank (A) stabilised the variance of most ELISA data examined. Transformed A values were used to calculate the true limits, at a set protection level, for false positive (C) and false negative (D). Methods are discussed to reduce the number of undifferentiated samples, i.e. the samples with response falling between C and D. The whole procedure was set up for use with an electronic spreadsheet. With the addition of few instructions of the type ifthenelse in the spreadsheet, the ELISA results were obtained in the simple trichotomous form negative/undefined/positive. This allowed rapid analysis of more then 1100 maize samples testing for the presence of seven aphid-borne viruses in fact almost 8000 ELISA samples.- (literal)

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