Characterization of heat-induced lactosylation products in caseins by immunoenzymatic and mass spectrometric procedures (Articolo in rivista)

Type
Label
  • Characterization of heat-induced lactosylation products in caseins by immunoenzymatic and mass spectrometric procedures (Articolo in rivista) (literal)
Anno
  • 2002-01-01T00:00:00+01:00 (literal)
Alternative label
  • Scaloni A., Perillo V., Franco P., Fedele E., F., Froio R., Ferrara L. and Bergamo P. (2002)
    Characterization of heat-induced lactosylation products in caseins by immunoenzymatic and mass spectrometric procedures
    in Biochimica et biophysica acta. G, General subjects (Print)
    (literal)
Http://www.cnr.it/ontology/cnr/pubblicazioni.owl#autori
  • Scaloni A., Perillo V., Franco P., Fedele E., F., Froio R., Ferrara L. and Bergamo P. (literal)
Pagina inizio
  • 30 (literal)
Pagina fine
  • 39 (literal)
Http://www.cnr.it/ontology/cnr/pubblicazioni.owl#numeroVolume
  • 1598 (literal)
Rivista
Http://www.cnr.it/ontology/cnr/pubblicazioni.owl#descrizioneSinteticaDelProdotto
  • La 5'-nucleotidasi/phosphotransferasi citosolica cN-II, specifica per monofosfati purinici e loro deossiderivati, agisce attraverso la formazione di un intermedio del tipo fosfo-enzima. Questo enzima è stato implicato assieme ad altre nucleotidasi in alcune disfunzioni del sistema nervoso. Il fosfato può essere sia rilasciato portando alla idrolisi del 5'-mononucleotide o essere trasferito and un altro nucleoside che agisce come accettore. Reattivi chimici che specificamente modificano residui di Asp o Glu inibiscono selettivamente l'enzima e tale inibizione è parzialmente inibita da substrati dell'enzima o da inibitori fisiologici. Esperimenti di peptide mapping sull'enzima fosforilato precedentemente trattato con boro-idruro triziato hanno permesso l'isolamento del peptide marcato. La sua analisi di sequenza ha dimostrato che la radioattività è associata a un idrossimetil derivato che risulta dalla riduzione dell'intermedio Asp-52-fosfato. Esperimenti di site-directed mutagenesis hanno confermato il ruolo dell'Asp-52 nella catalisi dell'enzima ed hanno suggerito che anche Asp-54 assiste la formazione della specie del tipo fosfo-intermedio. Da allineamenti di sequenza con altre proteine presenti nel database possiamo concludere che cN-II, assieme ad altre nucleotidasi, appartiene ad un'ampia superfamiglia di idrolasi con differente specificità verso differenti substrati e differente ruolo funzionale. (literal)
Note
  • PubMe (literal)
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  • IABBAB (literal)
Titolo
  • Characterization of heat-induced lactosylation products in caseins by immunoenzymatic and mass spectrometric procedures (literal)
Abstract
  • Nonenzymatic glycosylation of proteins occur during milk thermal treatment through the Maillard reaction. Immunoenzymatic and spectrometric methodologies were used to investigate caseins modification in samples submitted to different processing. As expected, protein-bound carbonyl content in raw and thermal-treated milks was positively correlated with the severity of the treatment. When immunoblotting and ELISA experiments were carried out either on isolated or whole milk proteins, carbonyl accumulation on caseins and macromolecular aggregates produced by thermal processing was evidenced. A comparative electrospray-mass spectrometry (ES-MS) analysis of different milks allowed verifying the extent of Amadori adducts on the more abundant protein components (alphas1- and beta-casein (alphas1- and beta-CN)). A combined matrix-assisted laser desorption ionization (MALDI)-MS/Edman degradation approach on enzymatic digests identified caseins modification sites. In moderately heat-treated milks, we observed that lactosylation occurred specifically at Lys-34 (alphas1-CN) and Lys-107 (beta-CN); whereas, samples subjected to more severe conditions presented modification at Lys-7, Lys-34, Lys-83, Lys-103, Lys-105, Lys-132 and Lys-193 (alphas1-CN) and at Lys-32, Lys-48, Lys-107, Lys-113 and Lys-176 (beta-CN). Differences in secondary structure of these components was assayed by circular dichroism (CD) spectroscopy. (literal)
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