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Design of cassette vectors permitting cloning of all types of human TCR variable alpha and beta regions (Articolo in rivista)

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Design of cassette vectors permitting cloning of all types of human TCR variable alpha and beta regions (Articolo in rivista) (literal)

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Caivano A, D'Apice L, Tiberio C, Prisco A, Acuto O, Guardiola J, De Berardinis P. (2001)
Design of cassette vectors permitting cloning of all types of human TCR variable alpha and beta regions
in Journal of immunological methods (Print)
(literal)

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Caivano A, D'Apice L, Tiberio C, Prisco A, Acuto O, Guardiola J, De Berardinis P. (literal)

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La versatilità di questa tecnologia, messa a punto all' Istituto di Biochimica delle Proteine, rende questo approccio estremamente utile per intraprendere studi di immunologia cellulare. Per tale motivo i nostri vettori cassetta sono oggetto di continua richiesta da parte di numerosi laboratori nazionali ed internazionali, come testimoniato dalle lettere di transfer agreement che abbiamo collezionato (literal)

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Messa a punto di una nuova metodologia che consente la ricostituzione di qualsiasi specificità antigenica linfocitaria T umana in un ibridoma murino dotato di crescita pressoché illimitata. La ricostituzione della specificità antigenica si ottiene mediante lutilizzo di vettori cassetta da noi ingegnerizzati, che consentono il trasferimento delle catene alpha e beta del recettore linfocitario T. (literal)

Note

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Institute of Protein Biochemistry and Enzymology, CNR, Via Guglielmo Marconi 10, 80125, Naples, Italy. International Institute of Genetics and Biophysics, CNR, Via Guglielmo Marconi 10, 80125 Naples, Italy Laboratory of Molecular Immunology, Pasteur Institute, Paris, France (literal)

Titolo

Design of cassette vectors permitting cloning of all types of human TCR variable alpha and beta regions (literal)

Abstract

T cell clones are an irreplaceable asset for the study of immune responses relevant to human pathologies. Such cells, however, cannot always be maintained in long-term culture. In order to reconstitute functional human T cell receptors (TCRs) into stable and fast growing hybridoma T cells, we developed a general approach based on a versatile cassette system, which allows cloning of all types of human T cell receptor variable alpha and beta region genes fused to murine constant regions. These chimeric constructs are easily excised and transferred into expression vectors that can be used to transfect a human CD4-expressing murine T cell hybridoma recipient. The resulting transfectants are highly stable both in terms of T cell receptor-CD3 expression and IL-2 response to the specific antigenic stimulus. Using these cassette vectors, we reconstituted the original HLA-restricted antigen specificity for two human T cell clones, one recognizing an immunodominant epitope of HIV-1 gp120, and the other recognizing an immunodominant epitope of HIV-1 reverse transcriptase. We found that the reconstituted hybridomas maintain the ability of the original T cell clones to recognize the appropriate epitope in the context of the relevant MHC either as a synthetic peptide or after processing. Their unlimited growth capacity makes them particularly suited for in vitro studies. (literal)

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