Assessment of sperm viability in boar, rabbit and rooster: a modification of the fluorometric ethidium bromide exclusion procedure. (Articolo in rivista)

Type
Label
  • Assessment of sperm viability in boar, rabbit and rooster: a modification of the fluorometric ethidium bromide exclusion procedure. (Articolo in rivista) (literal)
Anno
  • 2003-01-01T00:00:00+01:00 (literal)
Alternative label
  • Gliozzi T.M., Luzi F., Cerolini S. (2003)
    Assessment of sperm viability in boar, rabbit and rooster: a modification of the fluorometric ethidium bromide exclusion procedure.
    in Theriogenology
    (literal)
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  • Gliozzi T.M., Luzi F., Cerolini S. (literal)
Pagina inizio
  • 635 (literal)
Pagina fine
  • 645 (literal)
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  • IMPACT FACTOR 2.387 (literal)
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  • 60 (literal)
Rivista
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  • Le tecniche di riproduzione avanzate attualmente in uso, quali fecondazione artificiale con seme fresco e congelato, richiedono di disporre di un efficiente sistema di valutazione della qualità del seme. Alcuni metodi per la valutazione dell’integrità cellulare si basano sull’esclusione dei coloranti dalle cellule vive con membrana integra. I metodi microscopici basati su questo principio sono soggettivi e laboriosi. La citofluorimetria permette di realizzare questo tipo di valutazioni su numeri molto maggiori di cellule, ottenendo test ripetibili e obiettivi, ma la sua diffusione è limitata dal costo elevato dell’apparecchiatura. In questo lavoro si è utilizzato in varie specie un metodo descritto in letteratura basato sull’esclusione da parte delle cellule con membrana plasmatica integra del colorante fluorescente bromuro di etidio. Mediante spettrofluorimetria si misura l’incremento della fluorescenza del colorante una volta legato agli acidi nucleici delle cellule con membrana danneggiata. La ricerca ha consentito di ottimizzare il metodo preesistente introducendo ulteriori misure delle fonti di fluorescenza aspecifica per ottenere valutazioni più accurate della proporzione di cellule danneggiate sia nel pollo, in cui il metodo di base era già stato applicato, che in verro e in coniglio. La procedura fornisce un metodo di valutazione rapido e obiettivo della integrità degli spermatozoi, oltre ad avere il vantaggio di utilizzare un’apparecchiatura dal costo accessibile. (literal)
Note
  • ISI Web of Science (WOS) (literal)
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  • 1 CNR (IBBA) 2 UNIMI (literal)
Titolo
  • Assessment of sperm viability in boar, rabbit and rooster: a modification of the fluorometric ethidium bromide exclusion procedure. (literal)
Abstract
  • The ethidium bromide (EtBr) exclusion procedure, a fluorometric method for measuring sperm cell viability, was studied to optimize the use of this technique on boar, rabbit and rooster semen. Diluted semen was used for boars and roosters. Diluted rabbit semen did not allow for reliable fluorescence readings; the interference of granules characteristic of rabbit seminal plasma was suggested as its cause. Therefore, rabbit semen was washed on several Percoll and OptiprepTM density gradients, with the aim of removing the granules from the sperm suspension. The complete absence of granules was not obtained, however, the best result was provided by the 35/70% Percoll density gradient. Most spermatozoa formed a loose pellet with low contamination. Although the washing procedure resulted in a selective action, Percoll washed semen was used to assess the EtBr procedure. The fluorescence intensities of stained fresh and stained digitonin-permeabilized samples were corrected, respectively, for the nonspecific fluorescence measures of fresh and digitonin-permeabilized samples both unstained. The contribution of the dye was subtracted from the corrected values, then the ratio between the corrected values of fresh and permeabilized cells provided the proportion of damaged cells in the sample. The working cell concentration range giving a constant proportion of damaged cells was set using diluted semen for boars and roosters (8-32 x 10.000.000 cell/ml) and Percoll washed semen for rabbits (4-16 x 10.000.000 cell/ml). The reliability of the fluorometric method was compared with the traditional nigrosin-eosin (NE) staining technique. The intactness of sperm samples containing known proportions of fresh and killed cells was measured in defined working cell ranges. For boars and roosters the values determined by fluorometry agreed closely with those determined using the NE method. (literal)
Prodotto di
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